凝膠回收試劑盒（含柱）

保存條件 室溫干燥可保存一年，4℃保存可更長時間。

使用時如發現結晶，可于 37~55?C水浴加熱助溶。離心吸附柱不建議低溫或大于 30?C 保存，否則可能影響吸附效率。

凝膠回收試劑盒（含柱）

產品簡介

膠回收試劑盒利用硅基質材料在高鹽緩沖系統對 DNA 高效、專一吸附的原理，配備聚合美自主研發的膜結合液（又稱溶膠液）和高性能的硅膠膜離心吸附柱，可在 15 分鐘內清除凝膠、核酸染料及其他雜質，高效回收 DNA 片段。本試劑盒配套的膜結合液和離心吸附柱的最大吸附量為 20µg，對 100-10000 bp 線性雙鏈 DNA 片段的回收效率可高達 50-90%，也可用于單鏈 DNA 片段和質粒 DNA 的純化。因回收率受 DNA 片段大小、濃度等因素的綜合影響，故應盡量加大電泳的 DNA 片段濃度，以提高回收率。回收后的 DNA 片段可以直接用于酶切、連接、測序、標記、雜交和體外轉錄等多種分子生物學實驗。

回收效率

50 bp 回收效率：30-50%

100-200 bp 回收效率：50-70%

200-5000 bp 回收效率：70-90%

5 kb-10 kb 回收效率：50-70%

產品組份

膜結合液（MB）：25ml （50T）

膜漂洗液（MW）：15ml （50T） 初次使用前請按瓶標說明加入無水乙醇混勻

洗脫緩沖液（EB）：10ml （50T）

平衡液（BL）：25ml （50T） 請使用當天平衡液處理過的吸附柱

離心吸附柱及收集管：50（50T） 室溫密閉干燥保存

實驗準備

用戶需自行準備的材料：含 DNA 樣品的瓊脂糖凝膠，無水乙醇，異丙醇， 55oC 水浴，切膠設備，臺式離心機。

初次使用本試劑盒，請按瓶標說明向膜漂洗液（MW）中加入相應體積的無水乙醇（用戶自備），并在試劑瓶上做標記。

操作步驟

1. 柱平衡：向吸附柱中（吸附柱放入收集管中）加入 400 μl 的平衡液 BL，12,000 rpm （-13,400×g ） 離心 1 min，棄收集管中濾液，將吸附柱重新放回收集管中。（請使用當天處理過的柱子，這一步很重要，試劑盒放置時間長不用，處理一下效果如新，減少浪費。如果新開封馬上用，可以不做柱平衡）

2. 切膠：用干凈刀片將目的 DNA 條帶切下，盡量切除不含 DNA 的凝膠。注意：紫外線對 DNA 片段有損壞作用，切膠要迅速，避免長時間照射，同時做好眼睛及皮膚的防護。

3. 稱重：將切下的含有目的 DNA 條帶的凝膠切成小塊，放入已稱重的 1.5 ml 塑料離心管中，再稱重（總重-空重=凈重）。

4. 溶膠：加入等體積膜結合液（MB），60℃水浴，每隔 2-3 min 上下振蕩，直到凝膠*溶解。注意：如凝膠重量為 100 mg，其體積可視為 100 ul，則加入 100 ul 膜結合液；如凝膠濃度大于 2%，所用膜結合液體積加倍；對于  回收

<300 bp 的小片段或者大于 3000bp 的大片段，可在凝膠*溶解后再加入 1/2 膠塊體積的異丙醇以提高回收率；膠塊*溶解后最好將溶液溫度降至室溫再上柱，因為吸附柱在室溫時結合 DNA 的能力較強。

5. 吸附：待溶液冷卻后加入離心吸附柱中，室溫靜置 2 min，讓 DNA 片段與吸附柱中的硅膠膜充分結合，然后 12,000 rpm 離心 1 min，棄收集管中濾液。注意：如總體積超過 750 ul 可分 2 次將溶液加入同一離心吸附柱中；為增加目的 DNA 片段的洗脫濃度，也可將多管溶膠液加入到同一離心吸附柱中。

6. 清洗：加入 600 ul 的膜漂洗液（MW），12,000 rpm 離心 1 min，棄收集管中廢液。注意：膜漂洗液（MW）按要求加入乙醇，用后應立即蓋緊瓶蓋，以防酒精揮發; 如后續實驗要求純度較高，可再清洗一次。

7. 干燥：將離心吸附柱于 12,000 rpm 離心 2 min，甩干殘留漂洗液。注意：此步不能省略，否則殘留乙醇會影響后續實驗。

8. 洗脫：將離心吸附柱置于一個新的 1.5 ml 塑料離心管中，在吸附柱中央加入 30-50 ul 洗脫緩沖液（EB），室溫放置 2 min。12,000 rpm 離心 1 min 收集 DNA 片段。注意：為增加回收效率，可將洗脫液在 60℃預熱，也可將得到的溶液重新加入到離心管中，室溫放置 2 min，再次離心收集。如需使  用去離子水洗脫，可用 NaOH 調整其 pH 值在 7.0-8.5 之間）。